APLICAÇÕES DA BIOLOGIA
MOLECULAR NA ODONTOLOGIA:
CONCEITOS E TÉCNICAS
Ficha citações
FOL. Facul. Odontol. Lins./UNIMEP. v.14. n.2. jul/dez. 2002 p. 7-14.
SILVA, F.B; SOUZA, S.M.G.
“Os avanços na biologia molecular têm contribuído significativamente para o entendimento da etiologia das doenças humanas. As técnicas de recombinação dos ácidos nucléicos têm permitido aos pesquisadores identificar os vários genes responsáveis por doenças hereditárias, detectar agentes infecciosos em material biológico, avaliar os mecanismos de infecção dos microrganismos e conhecer os processos que regulam a diferenciação e proliferação celular (principalmente neoplasias), entre outros.” (p.8)
“A biologia molecular também vem apresentando aplicação bastante expressiva na pesquisa de marcadores genéticos úteis no diagnóstico laboratorial e na avaliação da predisposição a inúmeras doenças.” (p.8)
“Na área odontológica, a biologia molecular tem proporcionado o diagnóstico precoce da cárie dental, da doença periodontal e do câncer bucal. Além disso, a saliva atualmente está sendo usada no diagnóstico de doenças bucais e sistêmicas, e os marcadores genéticos, aplicados na identificação das demais neoplasias presentes no complexo maxilofacial.” (p.8)
“A análise molecular é um novo método de avaliação que busca as alterações expressas em nível genético, ou seja, pelo DNA. O DNA genômico é obtido de qualquer material biológico, mas as amostras mais utilizadas são sangue (leucócitos), tecidos biopsiados (células residentes), fluido amniótico e vilosidade coriônica.” (p.9)
“Para extrair o DNA do núcleo celular, são necessárias várias etapas, que compreendem lise celular, extração das proteínas e do RNA, precipitação do DNA, até a purificação.” (p.9)
“O DNA obtido será digerido por enzimas de restrição que produzem muitos fragmentos de DNA do gene em estudo. Essas enzimas de restrição cortam a dupla hélice do DNA em uma seqüência específica, denominada de sítio de restrição, que varia de quatro a seis bases. A enzima de restrição EcoRI sempre reconhece uma mesma seqüência e faz o corte entre as bases G e A de cada cadeia.” (p.9)
“A eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida é um método simples e rápido que separa o DNA em fragmentos de tamanhos diferentes usando enzimas de restrição. Quando submetidas a um campo elétrico (matriz) em pH neutro, as moléculas de DNA são atraídas para o pólo positivo e repelidas do pólo negativo. Quando a matriz apresenta resistência à migração das moléculas, os fragmentos menores podem se mover com maior facilidade do que os maiores, havendo, então, uma migração diferenciada dos fragmentos.” (p.9)
“O progresso da engenharia genética na medicina terá efeitos similares na prática do cirurgião dentista. Novos métodos serão abandonados em favor das técnicas da bioengenharia. O avanço mais significativo será na interação entre dentistas e pacientes, com o desenvolvimento de novos sistemas de diagnóstico, prevenção e tratamento.” (p.11)
“A microbiologia bucal é essencial para a identificação e caracterização de vários microrganismos envolvidos nas infecções bucais. Muitos métodos têm sido usados na detecção da variação fenotípica e genotípica para a caracterização desses patógenos periodontais, assim como na identificação de bactérias da cavidade bucal. Por meio dessas técnicas, o patógeno pode ser diagnosticado antes que a doença esteja em estado avançado, sendo possível identificar, simultaneamente, mais de um patógeno. A PCR é uma das técnicas mais utilizadas na identificação de patógenos associados à doença periodontal, à placa e à carie dental.” (p.11)
“Com o sequenciamento, provavelmente será possível a modificação das bactérias que causam doenças bucais. A determinação do genoma bacteriano permitirá ao dentista pesquisar e compreender melhor a função celular desses organismos responsáveis pelo início da cárie dental e da doença periodontal.” (p.11)
“Na terapia endodôntica, os profissionais serão capazes de desenvolver geneticamente tecido pulpar dentro do canal para crescer e preencher a câmara. Será possível, também, a regeneração da perda de tecido ósseo alveolar, de tecido gengival e de cemento, proporcionando, assim, um ótimo nível de saúde periodontal.” (p.11,12)
“A genética do câncer tem se desenvolvido devido aos avanços nas técnicas de biologia molecular e de imunohistoquímica. O câncer é causado por componentes ambientais e alterações genéticas que ocorrem nos tecidos, com predisposição hereditária em algumas famílias. Câncer pode ser definido como uma coleção de distúrbios que compartilham, como característica afim, o crescimento celular descontrolado, formando uma massa de células chamada neoplasia ou tumor.” (p.12)
“Tem sido evidenciado que genes específicos estão alterados no câncer bucal. Muitas das proteínas desses genes podem ser detectadas por técnicas de imunohistoquímica, servindo como marcadores de lesões com alto risco de progressão para doença maligna. A maioria dos genes e proteínas desregulados no câncer bucal está associada à proliferação celular.” (p.12)
“As mutações somáticas no gene p53 são encontradas em aproximadamente 50% de todos os tumores humanos, tornando-o o gene de câncer geralmente mais alterado. O p53 é ativado em resposta a sinais de dano celular. Esse gene codifica um fator de transcrição que interage com pelo menos seis outros genes. Como o gene p53 é considerado um supressor tumoral, as mutações que nele ocorrem podem ocasionar uma perda de função.” (p.12)
“O gene p53 é importante por dois motivos. Primeiro, porque sua presença geralmente indica tumores mais agressivos, com chance de sobrevida baixa; segundo, porque ele é importante na prevenção do tumor. Alguns testes laboratoriais mostram que a inserção de um gene p53 normal em células tumorais resulta numa diminuição significativa da carcinogênese, sendo um indicativo de forma alternativa de tratamento do câncer.” (p.12)
“Atualmente, os patologistas têm dado maior importância à identificação da apoptose e da mitose para poderem melhor compreender a cinética e o desenvolvimento de diversos processos patológicos. A participação das alterações nos proto - oncogenes, genes supressores e genes associados com a apoptose está relacionada ao desenvolvimento e à progressão de tumores. Os avanços referentes a conceitos, mecanismos e técnicas de identificação são importantes na determinação da apoptose, como auxiliar no diagnóstico e no prognóstico dos cânceres humanos.” (p.13)
“Os carcinomas espinocelulares na cavidade bucal constituem a maior proporção de cânceres de cabeça e pescoço e umas das principais causas de morbidade e mortalidade mundial.” (p.13)
“A expressão da p53 foi mais elevada nos tumores com pobre diferenciação celular e em pacientes jovens.” (p.13)
“O leiomiossarcoma é um tumor muito raro da cavidade bucal e que apresenta dificuldade de identificação histopatológica entre tumor maligno e benigno. Nikitakis et al. realizaram o diagnóstico e prognóstico de dois pacientes por imunohistoquímica e marcadores moleculares. Os autores concluíram que a proteína p53 pode ser identificada em leiomiossarcomas, possibilitando a distinção entre os dois tipos de tumores. A expressão da proteína p53 também pode estar associada com a alta taxa de recorrência e com o curto período de sobrevivência.” (p.14)
“A técnica de imunohistoquímica tem contribuído para uma determinação mais precisa no prognóstico de pacientes com neoplasias, principalmente nos casos em que o diagnóstico definitivo não pode ser estabelecido pela coloração com a hematoxilina-eosina.” (p.14).
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